BioximiaForYou

Amilaze

Alfa-amilaza (diastaza, alfa-1,4-glukan-4-glukan-hidrolaza) spada v razred hidroliz, ki katalizira hidrolizo polisaharidov, vključno škroba in glikogena, v dekstrine in preproste di- in monosaharide (maltozo, glukozo).

Največja koncentracija amilaze je v trebušni slinavki in v žlezah slinavke - v obliki izoencimov trebušne slinavke in slinavke. V fizioloških pogojih je serumska amilaza sestavljena iz 40% pankreatične amilaze in 60% amilaze v slini. Z uporabo specifičnih inhibitorjev ali ločevanja z elektroforezo je mogoče ugotoviti izvor encima, ki je prisoten v plazmi. Amilazo iz plazme odstranijo ledvice in se izloči z urinom. To vodi k večji vsebnosti informacij, ki določajo aktivnost alfa-amilaze v urinu kot test, ki ocenjuje funkcionalno stanje trebušne slinavke. Rast amilazne aktivnosti je najpomembnejša pri diagnosticiranju bolezni trebušne slinavke.

Klinična in diagnostična vrednost:

Aktivnost krvi alfa-amilaze in urina se močno spreminja čez dan.

Hiperamalazemija - povečanje aktivnosti amilaze v krvnem serumu.

Ø Akutni pankreatitis - največje vrednosti se pojavijo v prvih 6 - 12 urah po pojavu simptomov bolezni. Po tem času se encimska aktivnost zmanjša, normalizira v 2-5 dneh. Če aktivnost ostane več kot 5 dni, to kaže na povečano vnetje.

Ø poslabšanje kroničnega pankreatitisa

Ø Perforacija dvanajstnika

. Črevesna obstrukcija

Ø akutni apendicitis

Ø Alkaloidi (morfij, heroin, kodein)

Ø Zastrupitev z metanolom

Ø Veliki odmerki etanola (za alkoholike)

Hipoamilazemija - zmanjšanje aktivnosti amilaze v krvnem serumu (praktično nima diagnostične vrednosti).

Ø pankreasna nekroza

Ø miokardni infarkt

Hiperamalazurija - povečano izločanje amilaze v urinu.

Ø akutni pankreatitis - v prvih 24 urah vnetja je opaziti povečanje encimske aktivnosti. Povecano izlocanje encima v urinu traja naslednjih 7 do 10 dni, kljub dejstvu, da je aktivnost amilaze v krvi po 3–4 dneh normalna.

Ø Rak trebušne slinavke

Ø Perforacija dvanajstnika

Ø žolčna bolezen

Ø Bolezni žlez slinavk, parotitis, kamni v kanalih za slinavko

Hipoamilaza - zmanjšanje sproščanja amilaze v urinu.

Ø Bolezni ledvic

Ø boleznijo jeter

"Določitev aktivnosti alfa-amilaze v bioloških tekočinah po enotni metodi Karavey"

Načelo: škrob se pod delovanjem alfa-amilaze hidrolizira, da se tvorijo proizvodi, ki z jodom ne dajejo barvne reakcije. Intenzivnost znižanja barve jod-škrobnega kompleksa na enoto časa je sorazmerna z aktivnostjo encima.

Preiskovani material: svež serum, urin.

Komplet vključuje:

Reagent №1 - blažilnik

Reagent št. 2 - koncentrirani substrat

Reagent №3 - koncentrirana raztopina joda

Reagent št. 4 - raztopina kalijevega fluorida

5 - klorovodikova kislina

Priprava reagentov za postopek analize: t

Delovna raztopina substrata: reagente št. 1 in št. 2 zmešajte v razmerju 24: 1.

Delovna raztopina joda: zmešajte destilirano vodo, reagent št. 3 in reagent št. 4 v razmerju 7: 1: 2.

Delovna raztopina klorovodikove kisline: vsebino steklenice 5 z destilirano vodo razredčite 16-krat.

Potek določanja:

Reagent

Izkušen vzorec

Kontrolni vzorec

BioXplorer

Amilaze

α-amilaza [α - (1,4) -glukan-4-glukanohidrolaza, KF 3.2.1.1] je encim, ki hidrolizira notranje 1,4 α-glikozidne vezi škroba, glikogena in drugih glukoznih polimerov. Pri ljudeh so glavni viri α-amilaze pankreas in žleze slinavk. Številni izooblici, izolirani iz bioloških tekočin in človeških tkiv, so verjetno heterogeni produkti posttranslacijskih sprememb dveh družin amilaznih izoencimov, katerih sinteza je kodirana z dvema lokoma gena Atu-1, salivnega (C) amilaznega tipa in Atu-2, pankreasa (P) Vrsta encima, tesno povezana s kromosomom 1. Izoencimi C in P nimajo velikih razlik v aminokislinski sestavi. Dva izooblik smo izolirali z gelno filtracijo na Sephadex v frakciji C-amilaze, od katerih ena vsebuje ogljikove hidrate. Molekularna masa izooblik, ki vsebujejo ogljikove hidrate, 57 kDa, brez ogljikovih hidratov - 55 kDa. Izoelektrične točke glavnih izooblik C-izoamilaz od 5,5 do 6,5. P-skupina izoamilaze ima manjšo molekulsko maso (53 kDa) in ne vsebuje ogljikovih hidratov. Izoelektrične točke teh beljakovin se gibljejo od 5,7 do 7,0.

Prepričljivi dokazi, da je amilaza tipa P nastala samo v trebušni slinavki, je odsotnost tega izoencima pri posameznikih s popolno pankreathektomijo. Nasprotno pa se lahko α-amilaza C-izoenzim sintetizira v različnih organih in tkivih. Visoka aktivnost C-amilaze je določena v tkivu jajcevodov in vsebini ciste jajčnikov. Posebne skupine izoamilaz, ki jih proizvajajo tkiva ženskih spolnih organov, niso odkrite v serumu ali urinu zdravih ljudi; porazdelitev izoamilaz je pri moških in ženskah enaka. Isoamilaze, ki spadajo v skupino C, najdemo tudi v človeškem mleku in tekočini za rane.

Klinični pomen določanja aktivnosti amilaze v serumu.

Določanje serumske aktivnosti α-amilaze je najpogostejši test za diagnosticiranje akutnega pankreatitisa. Pri akutnem pankreatitisu se aktivnost encima v serumu po bolečem napadu poveča 3–12 ur, doseže maksimum po 20–30 urah in se v štirih dneh vrne v normalno stanje z ugodnim potekom. Aktivnost α-amilaze (diastaze) v urinu se poveča 6 do 10 ur po povišanju serumske aktivnosti in se vrne v normalno stanje, najpogosteje tri dni po dvigu.

Zdaj je splošno znano, da povečanje celotne aktivnosti α-amilaze ni specifično za pankreatitis in druge bolezni trebušne slinavke. Klinične študije so pokazale, da se pri številnih boleznih pojavi povečana aktivnost a-amilaze, ki vključuje črevesno obstrukcijo, bolezni žolčevodov, apendicitis, parotitis in zunajmaternično nosečnost. Občutljivost in specifičnost določanja α-amilaze pri diagnozi akutnega pankreatitisa narašča s spremembami mej normalnih vrednosti (diskriminatorna raven norme in patologije je aktivnost 1,5–2-krat večja od zgornjih meja norme). V tem primeru je določitev aktivnosti a-amilaze najbolj informativen prvi dan razvoja akutnega pankreatitisa. Po mnenju nekaterih avtorjev določanje serumske aktivnosti α-amilaze pri kroničnem pankreatitisu nima diagnostične vrednosti.

Pri ljudeh α-amilaza, ki prosto prehaja skozi filtracijsko pregrado ledvičnih teles, reabsorbira epitelijske celice ledvičnih tubulov na enak način kot druge serumske beljakovine z nizko molekulsko maso. Povišanje serumske aktivnosti amilaze je lahko posledica oslabljenega izločanja encimov. Primer je stanje, imenovano makroamilazemija, ko je encim vezan na serumske imunoglobuline in tvori makromolekularni kompleks. Takšen kompleks se ne filtrira v urinu in ga ni mogoče odstraniti z drugimi mehanizmi, kar vodi v pomembno in včasih podaljšano povečanje aktivnosti α-amilaze v krvnem serumu. Makroamilazemija se pojavi pri zdravih ljudeh s pogostnostjo 1%, pri bolnikih s hiperamilazemijo s pogostnostjo 2,5%. Makroamilazemijo lahko diagnosticiramo z metodo ultracentrifugiranja, EF, gelsko kromatografijo, preprostim testom obarjanja kompleksa s polietilen glikolom.

Aktivnost serumske α-amilaze je pogosto povečana pri ledvični odpovedi, vendar ni povsem jasno, kaj povzroča to povečanje - povečanje tvorbe encima ali zmanjšanje njegove eliminacije. V takih primerih se lahko določijo dodatne informacije z določanjem hitrosti izločanja α-amilaze ali izračuna očistka encima.

Po mnenju mnogih avtorjev je najbolj občutljiv in specifičen test za diagnozo pankreatitisa raven aktivnosti P-izoenzima α-amilaze. Ta test je še posebej pomemben, če je pri bolniku z domnevno diagnozo pankreatitisa ugotovljena normalna skupna aktivnost amilaze. Z zmanjšano aktivnostjo P-amilaze lahko diagnosticiramo kronični pankreatitis. Delež P-izoamilaze v celotni aktivnosti α-amilaze je v urinu bistveno višji kot v serumu, verjetno zaradi razlik v izločanju izoencimov z ledvicami. Kljub temu je diagnostična vrednost določanja aktivnosti izoenzimov α-amilaze v urinu slabša od tiste v krvi.

Eksperiment - osnovna metoda znanosti
Opazovanje in merjenje sta vključena v tako kompleksno osnovno metodo znanosti kot eksperiment. V nasprotju z opazovanjem je za eksperiment značilen poseg raziskovalca v položaj predmetov, ki jih proučujemo, z aktivnim vplivom na predmet.

Tla so edinstvena sestavina biosfere
V poznem 19. stoletju. V. Dokuchaev, veliki ruski naravoslovec, je s svojimi študijami o černozem in drugih tleh ruske doline in Kavkaza ugotovil, da so tla naravna telesa v svojih zunanjih značilnostih in lastnostih sil.

Analiza urina
Analiza urina je serija kemijskih in fizikalnih testov, katerih rezultati kažejo specifično težo in pH vzorca ter prisotnost in raven krvi, glukoze in drugih sestavin v vzorcu. Ker so osnovni podatki pri kronični odpovedi ledvic in prejemajo.

Amilaze

α-amilaza (diastaza, 1,4-a-D-glukan hidrolaza, EC 3.2.1.1.) katalizira hidrolizo α-1,4-glukozidnih vezi škroba, glikogena in sorodnih polisaharidov v maltozo, dekstrine in druge polimere. Molekulska masa encima je okoli 48.000 D. Molekula vsebuje kalcijev atom, ki ne aktivira samo encima, temveč ga tudi ščiti pred delovanjem proteaz, aktivnost amilaze pa se povečuje z vplivom ionov klora. V krvi je predstavljen z dvema izoencema: pankreasnim - P-tipom in S-tipom, od katerih je vsak razdeljen na več frakcij. Izoencim tipa S je na splošno 45–70% (v povprečju 57%), ostalo je v P-tipu. Oba izoencima imata skoraj identične katalitske in imunološke lastnosti, rahlo se razlikujeta pri elektroforetski mobilnosti, vendar sta dobro ločena z gelsko filtracijo na DEAE - Sephadex. Obstaja tudi makroamilaza, ki se ne izloča preko ledvic, lahko pa jo najdemo v normalnem krvnem serumu (približno 1% zdravih ljudi) in patologiji (2,5%).

Visoka aktivnost amilaze je opažena v parotidni in trebušni slinavki. Vendar pa je njegova aktivnost, čeprav precej nižja, najdena v velikih in majhnih črevesih, skeletnih mišicah, jetrih, ledvicah, pljučih, jajčnih celicah, maščobnem tkivu. V krvi je encim povezan s plazemskimi beljakovinami in tvorjenimi elementi. Aktivnost encimov je enaka za moške in ženske in ni odvisna od narave zaužite hrane in časa.

Obstoječe metode za proučevanje aktivnosti a-amilaze v bioloških tekočinah so razdeljene v dve veliki skupini:

1. Saharifikacija (reduktometrija), ki temelji na študiji sladkorjev, ki nastanejo iz škroba, z zmanjševanjem učinka glukoze in maltoze.

2. Amiloklastika, ki temelji na določanju ostanka neobdelanega škroba: t

• glede na stopnjo intenzivnosti njene reakcije z jodom. Te metode so bolj občutljive in specifične, vendar je njihova natančnost v veliki meri odvisna od kakovosti škroba in optimizacije pogojev določanja.
• viskoznostne suspenzije škroba, nimajo visoke natančnosti in se sedaj ne uporabljajo.

3. Metode, ki uporabljajo kromogene substrate, temeljijo na uporabi kompleksov substratnih barvil, ki se pod delovanjem α-amilaze razgradijo in tvorijo vodotopno barvilo.

4. Metode, ki temeljijo na vezanih encimskih reakcijah: t

Škrob + H₂O Maltose + Maltotriose + dekstrin

Maltose + N₂O 2 glukozi

Glukoza + ATP Glukoza - 6 - F + ATP

Glukoza-6-F + NADF glukonat-6-F + NADFN

Aktivnost encima je določena s hitrostjo kopičenja NADPH.

Dve amiloklastični metodi sta bili odobreni kot enotni: Karavey (z odpornim škrobnim substratom) in Smith-Rohe.

Določanje aktivnosti amilaze z obarvanimi
substrat za podjetje za zaposlovanje "Lachema"

Načelo

α-amilaza katalizira hidrolizo netopnega obarvanega škrobnega substrata, da se tvori modro vodotopno barvilo. Količina sproščenega barvila je sorazmerna s katalitično aktivnostjo encima.

Določanje aktivnosti alfa-amilaze.

Alfa-amilaza (diastaza) je encim, ki izvaja hidrolitično cepitev polisaharidov na dekstrine, maltozo in glukozo. Končni produkti amilaze ne dajejo barvne reakcije z jodom. Žleze trebušne slinavke in slinavke so najbogatejše z amilazo. Amilaza se v krvi izloča predvsem iz teh organov.

Človeška krvna plazma vsebuje predvsem dva tipa amilaze: pankreas in slinavke, tretji tip amilaze je velika ali makroamilaza. Z urinom se pankreasna amilaza večinoma izloča, kar je eden od razlogov, zakaj je določanje amilaze v urinu bolj informativno kot v krvi za oceno funkcionalnega stanja trebušne slinavke. Menijo, da je 65% aktivnosti amilaze v urinu posledica pankreatične amilaze, medtem ko je 60% amilolitične aktivnosti v serumu zagotovljena z amilazo žlez slinavk. Pri akutnem pankreatitisu se povečuje aminaza trebušne slinavke v serumu na 89% in v urinu na 92%, ne da bi se pri tem spremenili indeksi amilaze žlez slinavke.

Aktivnost amilaze v krvi in ​​urinu je podvržena pomembnim spremembam skozi dan, prav tako pa so zabeležene tudi individualne razlike. Zaradi nihanja aktivnosti amilaze je potrebna študija dnevnega urina, da se oceni delovanje trebušne slinavke.

Obstoječe metode za določanje aktivnosti α-amilaze so razdeljene v dve skupini:

1. Metoda končne točke temelji na določanju ostanka neprebavljenega škroba glede na stopnjo intenzivnosti njegove reakcije z jodom (metoda Karavey).

2. Kinetična metoda.

serumska a-amilaza - 16-30 g / h * l

urinska α-amilaza - 28-160 g / h * l

1. Seruma ne smete hemolizirati.

2. Pogoji eksperimenta so zelo pomembni, zlasti točen čas inkubacije 5 minut, zato ni priporočljivo izvesti sočasno študijo več kot 5 serumov.

3. Določitev aktivnosti α-amilaze v urinu se izvede podobno kot določanje v krvi, vendar je v primeru hiperamilaze priporočljivo, da se urin redčijo s ponovnim izračunom.

4. Na aktivnost α-amilaze vplivajo zdravila - antibiotiki, zdravila proti bolečinam in tudi alkohol.

Povečanje aktivnosti amilaze se večinoma pojavi pri boleznih trebušne slinavke.

Pri akutnem pankreatitisu se aktivnost encima v krvi in ​​urinu poveča za več kot 10-krat. Hiperamalazemija se pojavi takoj po začetku bolezni, doseže največ 12 do 24 ur, potem pa se encimska aktivnost hitro zmanjša in se normalizira 2-6 dni. Značilno je, da hipramilazurija traja dlje kot povečanje encimske aktivnosti v serumu, zato je 2-3 dni po bolečem napadu bolj informativno določiti aktivnost α-amilaze v urinu.

Pri kroničnem pankreatitisu, raku trebušne slinavke, povečanje encimske aktivnosti ni tako pomembno. Poleg tega lahko pride do rahlega povečanja encimske aktivnosti pri boleznih, ki jih spremlja podobna klinična slika z akutnim pankreatitisom: akutni apendicitis, peritonitis, perforirana želodčna razjeda itd.

Zato izrazita amilazemija omogoča razlikovanje akutnega pankreatitisa od kroničnih bolezni trebušne slinavke in drugih akutnih bolezni trebušne votline.

Skoraj vedno amilazemijo spremlja amilazurija. Toda določanje aktivnosti amilaze v urinu je manj natančen diagnostični indikator, saj sproščanje amilaze v urinu je povezano z delovanjem ledvic. Rahlo zvišanje amilaze v krvi in ​​zmanjšanje njegove ravni v urinu je mogoče pojasniti s kršitvijo izločajoče funkcije ledvic.

Zmanjšanje aktivnosti amilaze je opaženo pri nekrozi trebušne slinavke, jetrnih bolezni (hepatitis, ciroza), obsežnih opeklin, sladkorne bolezni, kaheksije itd.

194.48.155.252 © studopedia.ru ni avtor objavljenih gradiv. Vendar pa ponuja možnost brezplačne uporabe. Ali obstaja kršitev avtorskih pravic? Pišite nam Povratne informacije.

Onemogoči adBlock!
in osvežite stran (F5)
zelo potrebno

Določanje amilaze v bioloških tekočinah

Amilaza v krvi in ​​raven tega indikatorja je normalna

• Kaj je ta encim?
• Metode za določanje
• Norma
• Razlogi za povečanje
• Zmanjšajte

Ena od pomembnih sestavin biokemične analize krvi je preučevanje njene encimske aktivnosti. To določa koncentracijo različnih encimov v plazmi, ki jih večinoma proizvajajo določeni organi. Ta vrsta specifičnosti jim omogoča uporabo kot diagnostična merila za ozko paleto bolezni. V tem članku bomo razpravljali o takšnem kazalniku, kot je hitrost amilaze, ki se nanaša na specifične markerje patologije trebušne slinavke.

Kaj je ta encim?

Že vrsto let se neuspešno bori s hipertenzijo?

Vodja Inštituta: »Presenečeni boste, kako enostavno je zdraviti hipertenzijo, če jo vzamete vsak dan.

Alfa-amilaza velja za enega od encimov pankreasnega soka (trebušne slinavke), ki je aktivno vključen v prebavni proces. Proizvaja ga eksokrina celica in skozi izločevalne kanale vstopa v dvanajstnik, kjer je odgovoren za delitev kompleksnih sestavin ogljikovih hidratov na enostavnejše. Vpleteni so v razgradnjo glikogena in škroba. Končni rezultat njihovega delovanja mora biti proizvodnja enostavne glukoze, ki jo telo porabi za povrnitev energetskih potreb celic.

Amilaza pa mora teči izključno v črevesni lumen. Običajno majhna količina vstopa v sistemski krvni obtok, saj ima vsaka celica v procesu vitalne dejavnosti neposreden stik s krvjo. Dokler celovitost celic trebušne slinavke ni kršena, koncentracija encima ne presega meja norme. Amilaza v krvi zaradi visoke encimske aktivnosti, ki vpliva na katerokoli tkivo telesa, lahko povzroči njihovo uničenje. Zato je treba njegovo količino ohraniti na konstantni ravni.

Za zdravljenje hipertenzije so naši bralci uspešno uporabljali ReCardio. Ko smo opazili priljubljenost tega orodja, smo se odločili, da vam ga predstavimo.
Več o tem preberite tukaj...

Metode in testi za določanje aktivnosti amilaze v krvi

Amilaza v krvi kroži na ta način: encim izločajo celice žleznih trebušnih slinavk, vstopajo v kri in se prenašajo v vsa plovila. V jetrih je delno nevtraliziran. Ta del encima, ki nima časa za kolaps, prehaja skozi renalni filter, kjer se koncentrira in izloči z urinom. Ta mehanizem je osnova za določanje koncentracije alfa-amilaze v različnih bioloških tekočinah.

Glavne analize vključujejo:

• Biokemijska analiza za določanje alfa-amilaze v krvi;
• Biokemijska analiza urina za določanje urinske amilaze (analiza diastaze).

V klinični praksi se pogosto uporablja druga metoda, saj je tehnično veliko lažje izvesti in ne zahteva vzorčenja krvi. Poleg tega je bolj občutljiva in specifična. V stabilno velikem obsegu krvi in ​​zunajcelične tekočine je encim v bolj razredčenem stanju kot v majhni količini urina. Zato je amilazna aktivnost urina nekajkrat višja od aktivnosti krvne plazme.

Normalna zmogljivost

Pri vrednotenju rezultatov analize jih je treba primerjati z nekaterimi standardi. Pomembno je upoštevati, da norma vključuje oceno v nekaterih merskih enotah. Zato bodite pozorni na tiste znake, ki so navedeni po številkah v stolpcu rezultatov analize. Poleg tega se lahko hitrost amilaze, kot je določena v različnih laboratorijih, razlikuje zaradi uporabe reagentov z različno občutljivostjo. Običajno je laboratorij ob rezultatu navedel stopnjo.

Splošno sprejeti standardni indikatorji diastaze in alfa-amilaze v tabeli.

Za biokemijo, ki določa amilazno aktivnost krvi, je značilno, da je hitrost amilaze pri ženskah in moških enaka. Spolni hormoni nimajo pomembnega vpliva na ta encim.

Vzroki in mehanizmi za povečanje kazalnika

Pravilna razlaga rezultatov analiz za določitev koncentracije amilaze v plazmi ali urinu lahko resnično pomaga pri diagnosticiranju številnih bolezni. V klinični praksi se najpogosteje pojavljajo situacije, v katerih je amilaza ali diastaza povišana. To prikazuje, kaj je nastalo:

• Povečana sekretorna aktivnost trebušne slinavke;
• Prisotnost ovir v kanalih trebušne slinavke ali njihova kompresija, ki otežuje odtok pankreasnega soka, ki vsebuje amilazo;
• Prikritje tkiva trebušne slinavke je travmatično, vnetno, nekrotično (destruktivno) ali neoplastično.

Zato se zvišanje alfa-amilaze v krvi in ​​diastaze v urinu nanaša na specifične označevalce za takšne bolezni trebušne slinavke in njenih kanalov: t

1. Z poslabšanjem kroničnega pankreatitisa;
2. Pri akutnem pankreatitisu je fokalna nekroza trebušne slinavke (samouničenje tkiva žleze z encimi), peripankreatična infiltracija ali v začetnih fazah hude pankreatične nekroze;
3. Rak trebušne slinavke. Hitrost amilaze je v večji meri presežena, kadar se tumor nahaja v glavi in ​​telesu organa;
4. Različne vrste holelitiaze s holedoholitiazo (migracija kamnov v žolčevod);
5. Poraz velike duodenalne bradavice dvanajstnika v obliki stenotičnega papilitisa, zagozdenega kamna in rakavih tumorjev.

Povečana aktivnost amilaze pri drugih boleznih in stanjih

Včasih se morate soočiti s situacijami, v katerih ni očitnih težav z trebušno slinavko, vendar pa indikatorji alfa-amilaze in diastaze presegajo normalne vrednosti. To pomeni, da obstajajo:

• Napake v prehrani;
• Uporaba alkoholnih pijač;
• Poslabšanje kroničnega holecistitisa in vnetnega procesa v jetrih;
• Ektopična nosečnost;
• Vnetno-destruktivne bolezni trebušnih organov (perforirani ulkus, apendicitis, peritonitis, črevesna obstrukcija in drugi);
• Virusne okužbe, ki jih spremlja poliglandulitis (večkratne vnetne spremembe v skoraj vseh slinavkah in trebušni slinavki). To se zgodi s parotitisom, citomegalijo in okužbo z virusom Epstein-Barr.

Zmanjšajte

Dešifriranje testov, katerih rezultati so pokazali zmanjšanje aktivnosti amilaze v krvi, se redko zahteva. Še vedno, včasih se moraš soočiti s tem. To je mogoče z:

• Popolno ali skoraj popolno uničenje trebušne slinavke kot posledica nekroze trebušne slinavke;
• Transformacija raka večine pankreasa, pri kateri ni praktično nobenih normalnih celic z ohranjenimi funkcionalnimi sposobnostmi;
• Odstranitev celotne ali subtotalne resekcije trebušne slinavke;
• Genetske motnje encimske aktivnosti v telesu (cistična fibroza).

Raven amilaze v krvi in ​​urinski diastazi je zanesljiv vodilni znak, ki kaže smer diagnostične poti za bolezni trebušne slinavke. Pravilna ocena testov v kombinaciji s primerjavo rezultatov drugih vrst raziskav pušča majhno možnost, da bi številne bolezni ostale neopažene.

Klinična in diagnostična vrednost določanja aktivnosti alfa-amilaze

V krvi in ​​urinu

Aktivnost alfa-amilaze v krvi in ​​urina v teku dneva (kot tudi od enega dneva do drugega) se bistveno razlikuje. Poleg tega so opazili pomembne individualne razlike teh indikatorjev pri osebah brez patologije prebavil. Glede na nihanja v izločanju alfa-amilaze v urinu je priporočljivo raziskati aktivnost encima v urinu, odvzetem na dan.

Spremembe v aktivnosti alfa-amilaze v krvi in ​​urinu se pojavijo med nosečnostjo. Hiperamalazemija. Aktivnost alfa-amilaze se znatno poveča pri boleznih trebušne slinavke. Pri akutnem pankreatitisu se aktivnost encima v krvi in ​​urinu poveča 10 do 40-krat. Hiperamilazemija se pojavi na začetku bolezni, doseže največ 12-24 ur po razvoju, nato se hitro zmanjša in doseže normo za 2-6 dni.

Aktivnost encima se lahko poveča pri številnih boleznih, ki imajo podobno klinično sliko z akutnim pankreatitisom, in sicer: akutni apendicitis, peritonitis in perforirana razjeda želodca in dvanajstnika. Pri bolnikih s peritonitisom je povečanje aktivnosti amilaze posledica razvoja bakterij, ki tvorijo amilazo. Običajno se aktivnost encima pri teh patoloških stanjih poveča za 3-5 krat.

Bolezni, ki povzročajo relativno majhno hiperamilazemijo ne-pankreasnega izvora (t.j. ne vplivajo neposredno na trebušno slinavko), vključujejo holecistitis, holelitiazo, stanje, povezano z rupturo žolčnika, bolezni ledvic, odpoved ledvic, metastaze rakavega tumorja v pljučih in poškodbe žlez slinavk. z obturacijo njihovih kanalov (jasna klinična slika parotitisa olajša razlago hiperamilazemije), prostatitis, travmatična možganska poškodba, travmatični šok, opekline, pljučnica, diabetična ketoacidoza, splav, pooperativno obdobje.

Aktivnost alfa-amilaze v serumu se poveča tudi z ezofagealno perforacijo, razjedo želodca, gastritisom, akutno črevesno obstrukcijo, ishemijo in infarktom tankega črevesa, peritonitisom, rupturo cevi med zunajmaternično nosečnostjo, salpingitisom, aortno anevrizmo.

Glavni vzroki za hiperamilazemijo so: oslabljen izloček izločanja iz žlez (proizvajalci alfa-amilaze), povečana prepustnost histoematogene pregrade v žlezah, nekroza tkiva, oslabljeno sproščanje encimov skozi ledvični filter.

Nekateri drugi hormoni in številna farmakološka zdravila, predvsem učinkovine, ki vodijo v redukcijo sfinktra Oddi, povzročajo adrenalin: adrenalin, histamin, sekretin, furosemid, salicilate, antikoagulante, morfij, pantopon, opij, kodein, tetraciklin in tudi alkohol.

Kljub dejstvu, da hiperamilazemijo skoraj vedno spremlja peramilazurija, določanje aktivnosti alfa-amilaze v urinu ni vedno natančen diagnostični indikator, saj je sproščanje amilaze v urin povezano z delovanjem ledvic. Poleg tega ledvice izločajo le 24% amilaze, ki jo izločajo prebavne žleze iz krvi.

Študija aktivnosti alfa-amilaze v dnevnem urinu je bolj zanesljiv biokemični test za odkrivanje bolezni trebušne slinavke kot študija, ki temelji na analizi enega samega dela. Po aktivnosti krvne alfa-amilaze, ki se po napadu pankreatitisa vrne v normalno stanje, lahko ostane povišana v urinu do 7 dni.

Koeficient "aktivnost alfa-amilaze v krvi / aktivnost alfa-amilaze v urinu" je indikator funkcionalne uporabnosti ledvičnega filtra.

Hipoamilamin v klinični praksi je redka. Opažamo jo pri bolnikih z boleznimi jeter (hepatitis, ciroza), malignimi tumorji (zlasti v prisotnosti metastaz v jetrih), obsežnimi opeklinami, kožo, sladkorno boleznijo, hipotiroidizmom, pogostimi motnjami hranjenja, hujšanjem, kaheksijo in tudi pod vplivom zastrupitve ( na primer v primeru toksikoze pri nosečnicah). Zmanjšanje aktivnosti alfa-amilaze najpogosteje kaže na pomanjkanje eksokrine funkcije sub-želodčne žleze. Uvedba citratov in oksalatov vodi v zmanjšanje encimske aktivnosti.

Določanje skupne aktivnosti laktat dehidrogenaze

Laktat dehidrogenaza (L-laktat; NAD-oksidoreduktaza, EC 1.1.1.27) je glikolitični (citosolni cink) encim (molekulska masa 135.000 D), ki reverzibilno katalizira oksidacijo L-laktata v piruvično kislino. Nepogrešljiv udeleženec v tej reakciji je oksidiran nikotinski adenin dinukleotid, ki se uporablja kot kofaktor encima, ki igra vlogo akceptorja vodika.

Reakcijo, ki jo katalizira laktat dehidrogenaza, lahko predstavimo na naslednji način:

SNSNONSOO "+ OVER + Laktat dehidrogenaza SNSSOSOO '+ OVER • H + H +

Encim je široko razširjen pri ljudeh. Glede na stopnjo zmanjšanja encimske aktivnosti lahko organe in tkiva uredimo po naslednjem vrstnem redu: ledvice, srce, skeletne mišice, trebušna slinavka, vranica, jetra, pljuča, krvni serum. V slednjih je bilo ugotovljenih več različnih proteinov (izoencimov), ki imajo katalitske lastnosti tega encima. Spremembe v strukturi beljakovinskega dela izoencimov določajo njihove različne fizikalno-kemijske lastnosti (zlasti različne elektroforetske mobilnosti v agarju, škrobu, poliakrilamidu in drugih gelih).

V plazmi (serumu) krvi smo identificirali pet laktatnih dehidrogeaznih izoencimov - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 -, ki se nahajajo v gelu v padajočem vrstnem redu elektroforetske mobilnosti.

Vsak od izoencimov je tetramer, ki ga tvorijo podenote H in M. Ugotovili smo, da frakcija LDH1 izvira predvsem iz tkiva srca, LDH5 iz jeter. LDH v citoplazmi celic in serumu predstavlja 5 izoencimov.

Podenoto M najdemo predvsem v tkivih z anaerobno presnovo, podenoto H pa v tkivih s prevlado aerobnih procesov. Metoda elektroforeze na nosilcih pomaga razdeliti vseh 5 izoencimov LDH, ki predstavljajo naslednji odstotek v krvnem serumu zdravih ljudi: LDH; (14–26%), LDH ^ (29–39%), LDH (20–26%), LDH4 (8–16%), LDH (6–16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktat dehidrogenaza se ne nahaja samo v plazmi, temveč tudi v znatnih količinah v rdečih krvnih celicah, zato mora biti serum, uporabljen za analizo, svež, brez kakršnekoli hemolize.

Metode za določanje skupne aktivnosti LDH so razdeljene v dve glavni skupini: 1) kinetična, na podlagi Warbur-optičnega testa (optični učinek, povezan s pretvorbo NAD v NAD • N in obratno) in 2) metode, ki določajo količino nastalega proizvoda ali porabljen substrat po določeni inkubacijski dobi (metode končne točke).

Delo št. 32 Kolorimetrična dinitrofenilhidrazin metoda za določanje aktivnosti laktat dehidrogenaze v krvnem serumu (po Sevel in Tovarek)

Načelo metode. L-laktat v alkalnem mediju v prisotnosti serumskega LDH in dodanega NAD oksidira v piruvat. Glede na stopnjo njegove tvorbe in presoja o aktivnosti encima.

Reagenti

1. 0,45 mol / l raztopine natrijeve mlečne kisline. V merilno bučko s prostornino 100 ml dodamo 5 ml mlečne kisline v koncentraciji 800 g / l in 10 ml mlečne kisline v koncentraciji 400 g / l in jo nevtraliziramo z 2 N raztopino natrijevega hidroksida v slabo alkalno reakcijo s pH 7,5 (z uporabo fenolftaleina je treba razviti šibko t roza barva). Količine se z destilirano vodo dovedejo do oznake.

2. 0,03 mol / l raztopine natrijevega pirofosfata, pH 8,8. V merilno bučko s prostornino 500 ml prispevamo 6,69 g Na₂ R₂O₅ • N₂Približno 50 ml diet, razredčenih z vodo, se mešanica temeljito premeša in pH raztopine naravna na 8,8 z 1N raztopino HCl. Volumen vsebine bučke se z destilirano vodo prilagodi na oznako. Reagent je stabilen en mesec, če je shranjen v hladilniku.

3. Raztopina NAD. 3 mg NAD (kemično čista) se raztopi v 1 ml destilirane vode (s hitrostjo 0,6 mg na vzorec). Reagent je stabilen 4 tedne, če je shranjen v hladilniku.

4. Raztopina 2,4-dinitrofenilhidrazina. 19,8 mg 2,4-dinitrofenilhidrazina raztopimo v majhni količini 1N raztopine klorovodikove kisline z segrevanjem zmesi v vodni kopeli. Po ohlajenju volumen naravnamo na 1 ml z 1N klorovodikovo kislino. Naslednji dan se reagent filtrira. Raztopina je shranjena v jedi iz temnega stekla, uporabna je eno leto.

5. 0,4 n raztopina natrijevega hidroksida.

6. 1 n raztopina klorovodikove kisline.

7. Standardna raztopina natrijeve piruvične kisline. 11 mg kristalinične natrijeve piruvične kisline raztopimo v majhni količini destilirane vode, prenesemo v 100 ml merilno bučko in volumen raztopine dopolnimo do oznake z destilirano vodo. 1 ml raztopine vsebuje 110 µg natrijevega piruvata, kar ustreza 88 µg piruvične kisline. Delovno standardno raztopino pripravimo tako, da glavno 10-krat redčimo z destilirano vodo. V 1 ml delovne raztopine 8,8 μg piruvične kisline.

Potek odločnosti. 0,1 ml seruma, razredčenega 1: 2, zmešamo z 0,3 ml raztopine NAD in segrevamo 5 minut pri 37 ° C. Nato 0,8 ml ogrevalne raztopine fosforne kisline in 0,2 ml raztopine natrijeve mlečne kisline, predhodno segrete na 37 ° C. Mešanico inkubiramo pri 37 ° C 15 minut, po inkubaciji vzorec napolnimo z 0,5 ml 2,4-dinitofenilhidrazina in hranimo pri sobni temperaturi 20 minut. Nato dodajte 5 ml raztopine natrijevega hidroksida, zmešajte vsebino epruvete in po 10 minutah

Absorpcija se meri v območju valovnih dolžin 500–560 nm, na primer pri PEC s filtrom zelene svetlobe v kiveti z debelino plasti 10 mm. Zabeleži se optična gostota vzorca ob upoštevanju nadzora absorpcije.

Kontrolni vzorec damo na enak način kot poskusno, vendar razredčeni 1: 2 serum dodamo po inkubaciji zmesi. Izračunajte aktivnost encima v skladu z umeritveno krivuljo. Aktivnost laktat dehidrogenaze je izražena v mmolu piruvične kisline, ki nastane z inkubiranjem 1 l seruma 1 uro pri 37 ° C.

Da bi dobili podatke za izdelavo umeritvenega grafa, morate narediti naslednje. Iz delovne standardne raztopine natrijeve piruvične kisline pripravimo vrsto razredčitev (tabela 2). Nato v epruvete nalijemo 0,5 ml raztopine 2,4-dinitrofenilhidrazina. Nato standardne vzorce obdelajte na enak način kot izkušene.

Po dajanju kontrolnega vzorca v epruveto dodajte 0,6 ml destilirane vode, 0,8 ml raztopine pirofosfata in 0,5 ml raztopine 2,4-dinitrofenilhidrazina. Nato se vzorec obravnava na podoben način.

Da bi našli indikatorje aktivnosti laktat dehidrogenaze v dimenziji "mmol piruvične kisline na 1 liter seruma na 1 uro inkubacije pri 37 ° C", se število μmol piruvične kisline v standardnem vzorcu pomnoži s faktorjem 120 ali količino μg piruvične kisline - za 1,41.

Če želite izraziti aktivnost encima v enotah nove dimenzije, lahko uporabite drugo formulo:

Aktivnost laktat dehidrogenaze v mmol / (h • l) = C • 120: 88,

kjer je C količina μg piruvične kisline v vzorcu, 120 je faktor pretvorbe μg piruvične kisline v mg, 88 je faktor za pretvorbo indikatorjev iz mg v mmol.

Pri izdelavi umeritvene krivulje na osi abscise so vrednosti encimske aktivnosti izražene, izražene v dimenzijah, mmol DCH • 1) in predstavljene v zadnjem stolpcu tabele 33. Razmerje med koncentracijo piruvične kisline in optično gostoto je od 0 do 10 mmol / (h • l).

Klinična in diagnostična vrednost določanja aktivnosti amilaze

Amilaza je encim, ki razgrajuje škrob in glikogen. trebušna slinavka in žleze slinavke so najbogatejše. Vsebnost serumske amilaze je povezana z vnosom hrane: čez dan je aktivnost večja kot ponoči.

Aktivnost amilaze v serumu se poveča (hiperamilazemija) z: t

Akutni pankreatitis (10-30-krat, normaliziran za 6-7 dni, če aktivnost ostane povečana več kot 5 dni, to kaže na razvoj kroničnega procesa);

Poslabšanje kroničnega pankreatitisa;

Parotitis (vnetje žlez slinavk);

Lahko jih povzroči alkohol, adrenalin, droge.

Zmanjšanje aktivnosti amilaze v serumu (hipoamilazemija) je opaziti, kadar: t

Bolezni jeter (hepatitis, obstruktivna zlatenica, ciroza);

Povečana aktivnost v urinu (hiperamlazo) se opazi, če:

Akutni pankreatitis (ima večjo diagnostično vrednost kot definicija v serumu, saj traja več kot 7 dni);

Zmanjšanje encimske aktivnosti v urinu (hipoamilaza) se opazi, če: t

Odgovorite na vprašanja:

Navedite lokalizacijsko mesto, optimalni pH in biološko vrednost amilaze.

Napišite reakcijo, ki jo katalizira amilaza.

Kateri razred encimov amilaza?

* Katere so glavne bolezni, za katere je značilna povečana aktivnost amilaze. Pojasnite razlog.

* Povejte nam o vzrokih, vrstah, laboratorijski diagnozi in preprečevanju pankreatitisa.

3.8. Praktično delo "Določanje aktivnosti serumske aminotransferaze".

Cilji praktičnega dela:

za preučevanje klinične in diagnostične vrednosti določanja serumskih aminotransferaz;

se naučijo določiti aktivnost aminotransferaz v serumu.

Naloge za samostojno delo:

V beležnico napišite načelo in metodologijo praktičnega dela.

Opremite delovno mesto za praktično delo.

Opravite praktično delo.

Izvedite potrebne izračune.

Izpolnite obrazec za analizo. Ocenite rezultate.

Naredite sklep o delu in risbah.

Odgovorite na dodatna vprašanja.

Kot posledica transaminacije, ki se pojavi pod delovanjem AsAT in AlAT, se tvorita oksaloacetična in piruvična kislina. Ko dodamo raztopino 2,4-dinitrofenilhidrazina, se encimski postopek ustavi in ​​pojavijo se hidrazoni piruvične kisline. V alkalnem mediju nastanejo madeži, katerih intenzivnost je sorazmerna s količino nastale piruvične kisline.

1. Referenčna raztopina natrijeve piruvične kisline - 2 mmol / l.

2. 2,4 - dinitrofenilhidrazin - 1 mmol / l.

3. Natrijev hidroksid - 0,4 n.

4. Podlaga AsAT / AlAT.

2. FEC, kivete na cm.

4. Stojalo za epruvete.

5. Pipete za 1 in 5 ml.

Izvedite študijo aktivnosti aminotransferaz v serumu v skladu s tabelo.

Diagnostična vrednost določanja serumske aktivnosti amilaze

Pri ljudeh se alfa-amilaza izloča iz trebušne slinavke in žlez slinavk, njena majhna aktivnost pa najdemo v tkivih jeter in skeletnih mišic. Molekularna masa alfa-amilaze je relativno nizka, za razliko od večine encimov pa se filtrira v glomerulih ledvic in je v urinu. Alfa-amilaza je sestavljena iz dveh izoencimov: tipa pankreasa (P-tip) in slinavke (S-tipa). Pri zdravih ljudeh je v serumu približno 70% amilolitične aktivnosti v izoenzimu sline, v urinu pa približno enak odstotek pankreatične izoamilaze.

Hiperamilazemija in hiperamalazurija sta opažena pri številnih boleznih, vendar sta najbolj izrazita pri akutnem pankreatitisu, pri katerem se aktivnost večinoma poveča (do 90% ali več) zaradi izoencima pankreasa. Pri tej bolezni je bila največja količina amilaze v krvi in ​​urinu zabeležena v prvih 1-3 dneh. Virusni hepatitis in rak trebušne slinavke povzročata tudi hiperamilazurijo trebušne slinavke pankreasnega izvora.

Med hiperamilazemijo brez pankreasa vključujejo poškodbe žlez slinavke, odpoved ledvic. Razlogi za povečanje b-amilaze v krvi so oslabljeno izločanje žlez, ki vsebujejo b-amilazo, pomanjkanje izločanja amilaze iz telesa v ledvicah.

Številne farmakološke snovi, kortikosteroidi, salicilati, tetraciklin, furosemid, histamin povzročajo hiperamalazemijo. Za b-amilazo so značilne široke intra- in interindividualne spremembe. Najbolj informativna je definicija pankreatične izoamilaze.

Sprememba aktivnosti alfa-amilaze pri patologiji.

Določitev aktivnosti alfa-amilaze pridobi klinično in diagnostično vrednost pri diagnozi in spremljanju bolezni trebušne slinavke, prebavil, poškodb trebušnih organov. V nekaterih primerih (npr. Pri boleznih trebušne slinavke) je aktivnost samo enega izoencima, pankreasne alfa-amilaze, pomembnega pomena; pri spremljanju bolezni prebavnega trakta je potrebno primerjati encimsko aktivnost v serumu (sekrecijska aktivnost in dodatna absorpcija iz trebušne votline) in urin (pogosto je stopnja amilazurie stabilnejši in dolgotrajnejši indikator kot amilazemija).

Zvišane vrednosti aktivnosti alfa-amilaze opazimo pri:

Vnetne bolezni trebušne slinavke (akutne, otekle, kronične, reaktivni pankreatitis). Hiperamilazemija je običajno akutna (10-40-krat večja), pogosto pa kratkotrajna, tudi hiperamilaza je pomembna, vendar se raven alfa-amilaze v urinu zmanjšuje veliko počasneje kot v krvni plazmi (serumu). Ta lastnost je primerna za uporabo pri »poznem« diagnostičnem pregledu pacienta s kliničnimi znaki pankreatitisa, vendar se za spremljanje poteka procesa encimska aktivnost običajno meri v obeh bioloških tekočinah. Opozoriti je treba, da lahko hude oblike poškodb trebušne slinavke z grožnjo z nekrozo tkiva, kot tudi pankreatitis, ki jih spremljajo resne motnje metabolizma lipidov, spremljajo dejanski ali napačni (zaradi inhibicije amilaze s triacilgliceridi) zmanjšanje encimske aktivnosti. Če se sumi na katerokoli obliko pankreatitisa, je diagnostično pomembno ugotoviti ne le aktivnost alfa-amilaze v urinu in serumu, ampak tudi izračunati očistek amilazo-kreatinina po formuli:

Pri akutnem pankreatitisu ta izračunana vrednost presega 6%. Izračun očistka vam omogoča, da ne opravite korekcije za volumen in čas zbiranja urina, zato je rezultat manj odvisen od uporabljenih metod določanja.

Bolezni trebušne votline s podobnimi simptomi akutnega pankreatitisa: akutni apendicitis, peritonitis, perforirana želodčna razjeda in razjeda na dvanajstniku. Aktivnost alfa-amilaze se poveča za približno 3-5, redko za 10-krat, glavni vzrok hiperemijemije pa ni toliko povečano izločanje encima, kot njegova sekundarna absorpcija iz trebušnih organov v kri. Za razlikovanje diagnoze se opravi določitev alfa-amilaze in kreatinina v urinu ter izračun očistka kreatinina po zgornji formuli. S konstantno vrednostjo očistka od 1 do 4% je treba sumiti na bolezni trebušnih organov, ki se pretvarjajo v akutni pankreatitis.

Iz istega razloga se aktivnost alfa-amilaze bistveno poveča z ezofagealno perforacijo, gastritisom, akutno črevesno obstrukcijo, ishemijo in malim črevesnim infarktom, rupturo cevi, salpingitisom, aortno anevrizmo.

Pri boleznih notranjih organov, ki niso neposredno povezani s prebavnim sistemom, je možno zmerno povečanje aktivnosti skupne alfa-amilaze in / ali njenih izoencimov. Takšne bolezni vključujejo: holecistitis, holelitiazo, poškodbe ledvicnega parenhima in vnetne bolezni tega organa, odpoved ledvic, prostatitis, diabetično ketoacidozo, metastaze malignih tumorjev v tkivih in organih (zlasti v pljučih, trebušni slinavki, transverzalnem kolonu). Če se sumi na zgoraj opisane patologije, se izvede primerjalna analiza celokupne in pankreatične alfa-amilaze, saj se bolezni izoencima večinoma povečajo pri opisanih boleznih (onkološka poškodba trebušne slinavke in prečno debelo črevo poveča aktivnost obeh P in S izoencimov, kar omogoča razlikovanje med P in S izoencimi, kar omogoča razlikovanje od vnetnih bolezni istih organov).

Hiperamalazemija brez pankreasa se pojavi tudi pri boleznih žlez slinavk in nekaterih možganskih boleznih. V tem primeru se poveča skupna aktivnost alfa-amilaze tudi zaradi povečanja aktivnosti izoencima sline in za razlikovanje diagnoze je treba opraviti vzporedno merjenje celokupne in pankreasne alfa-amilaze (z normalno aktivnostjo P-amilaze se lahko domneva zgoraj omenjena patologija).

Primerjalna analiza aktivnosti alfa-amilaze v urinu in serumu je tudi dragocen diagnostični parameter pri ocenjevanju ledvične patologije. Ko je renalno filtriranje okrnjeno (pri nefrotičnem sindromu, glomerulonefritisu itd.), Se aktivnost alfa-amilaze v urinu močno zmanjša, medtem ko je v krvi opažena zmerna ali značilna hiperamlazemija, zato je koeficient amilaze v serumu eden od glavnih diagnostičnih parametrov. s to patologijo.

Postoperativni pogoji (sistemski vnetni odziv na operacijo, razvoj ARDS itd.) So lahko tudi vzrok za zmerno hiperamilazemijo.

Zmanjšanje aktivnosti alfa-amilaze običajno spremlja zmanjšanje funkcionalne aktivnosti trebušne slinavke, ki jo povzroči poškodba parenhima organa in / ali oslabljena eksokrina regulacija, najpogosteje pa se pojavi, ko:

Nekrotične spremembe v trebušni slinavki, povezane s hemoragičnim pankreatitisom in celotno nekrozo trebušne slinavke.

Pri boleznih jeter (hepatitis, ciroza). Maligni tumorji, zlasti pri jetrnih metastazah.

Hudo endokrino neravnovesje: hipotiroidizem, diabetes mellitus, hiperlipemija (zlasti s presežkom triacilgliceridov, zaradi zaviranja aktivnega centra encima), s splošno prehransko motnjo, kaheksijo in toksikozo nosečnic.

V nekaterih primerih se pri zgoraj opisanih patologijah serumska aktivnost alfa-amilaze morda ne zmanjša, vendar ostane nespremenjena.

Glavni odnosi v diferencialni diagnozi patologij s podobnimi simptomi.

Najpogostejša razmerja so:

Skupna alfa-amilaza / pankreasna komponenta. Uporablja se pri diferencialni diagnozi vnetnih in malignih procesov v trebušnih organih in nekaterih drugih tkivih. Pri vnetnih procesih, ki ne vplivajo na trebušno slinavko, je glavni vir aktivnosti skupne alfa-amilaze encim za slinavko, zato je razmerje »Skupna amilaza / pankreasna izoforma«> 1. Pri malignih poškodbah trebušnih organov je prispevek obeh izoencimov približno enak in ta koeficient je približno enak 1 8-2.4. Z vpletenostjo trebušne slinavke v vnetnem procesu ali v prisotnosti tumorskih metastaz v njem razmerje med aktivnostjo celotne in pankreatične amilaze ne presega 1,5.

Skupna alfa-amilaza / kreatinin v urinu in serumu. Uporabi se izračunani očistek (formula je podana v odstavku 3), ki omogoča razlikovanje vnetnega procesa v trebušni slinavki (razmerje presega 6%) in trebušnih organov (1-4%).

Skupna serumska alfa-amilaza / alfa-amilaza celotne urina. Uporablja se pri ocenjevanju funkcionalne aktivnosti ledvičnega filtra. Pri nefrotičnem sindromu in glomerulonefritisu je koeficient višji od 2-2,5.

Skupna serumska alfa-amilaza / serumski trigliceridi. Razmerje je »inverzno«, saj lahko presežek triacilgliceridov zavre aktivnost alfa-amilaze. Omogoča razlikovanje med patološkim zmanjšanjem proizvodnje encima in interferenco s hiperipmijo.

Skupna serumska alfa-amilaza / pankreasna lipaza. Biološki in diagnostični pomen koeficienta je podoben prejšnjemu razmerju, saj je prisotnost prostih triacilgliceridov v serumu neposredno povezana z aktivnostjo pankreasne lipaze. Delež je neposreden.

Spremembe v aktivnosti alfa-amilaze pri zdravih ljudeh. Motnje z drogami.

Aktivnost alfa-amilaze v krvni plazmi zdravih ljudi je v veliki meri odvisna od narave prehrane in živil, ki prevladujejo v prehrani. Poleg tega je ta parameter močno odvisen od intenzivnosti presnovnih procesov pri posamezniku, kot tudi od možganske aktivnosti subjekta. Zato se lahko aktivnost encima v istem posamezniku v različnih časih (tudi v istem dnevu) spreminja v območju 25-50% v obeh smereh.

Hiperamilazemijo pri zdravih ljudeh lahko povzroči čustveno stanje (stres, povečana duševna aktivnost), pitje (celo enkrat) alkohola, povezano pa je tudi s prehrano, bogato z beljakovinami in osiromašenimi z ogljikovimi hidrati in sladkorji. Hipoamilazemija se pojavi s povečanjem izkoriščenosti glukoze, s postom, z aktivnimi vadbami in pri ljudeh s hiperlipidemijo, tudi če ni kliničnih znakov.

Pri nosečnicah do 19 tednov se aktivnost alfa-amilaze v primerjavi z normo zniža, v obdobju do 33-34 tednov nosečnosti se stopnja aktivnosti poveča, do 37-40 tednov pa se stabilizira na ravni 10-20% višja od encimske aktivnosti pri zdravih ne-nosečih ženskah..

Na aktivnost alfa-amilaze in njenega izoenzima pankreasa pomembno vpliva tudi uporaba številnih zdravil, ki jih uporabljajo praktično zdravi ljudje v primeru prehodnih infekcijskih in vnetnih bolezni - na primer tetraciklinskih antibiotikov, furosemida, kortikosteroidnih protivnetnih zdravil, salicilatov.

Tudi pomemben vpliv na aktivnost alfa-amilaze imajo zdravila, ki vodijo do zmanjšanja sfinktra Oddi, vključno s hormoni (adrenalin, histamin, sekretin), narkotične snovi (morfij, pantopon, opij, kodein) in druga zdravila, ki povečajo izločanje encima in zavirajo izločanje izločanja iz trebušne slinavke.

Na osnovi biofile.ru

Načelo metode: Maltotrioid, povezan s kromogenom 2-kloro-p-nitrofenolom, se uporablja kot substrat za α-amilazo. Pod delovanjem a-amilaze se substrat hidrolizira, da se sprosti barvni 2-kloro-p-nitrofenol, maltotrioza in glukoza. Reakcija poteka hitro in ne zahteva prisotnosti koencimov v reakcijski zmesi. Hitrost hidrolize substrata je neposredno sorazmerna z aktivnostjo a-amilaze v vzorcu in se meri spektrofotometrično pri valovni dolžini 405 nm.

Podlaga-CNF ————> CNF + glukoza + maltotrioza

Linearnost metode: do 1500 U / l.

a-amilaza v neemoliziranem serumu ostane stabilna pri sobni temperaturi (18-25 ° C) 7 dni, pri temperaturi shranjevanja 2–8 ° C 2 meseca.

1) spektrofotometer s temperaturno nadzorovano kiveto, valovno dolžino 405 nm, dolžino optične poti 1 cm; reakcijska temperatura 37 ° C;

3) avtomatske pipete za 25 μl in 1000 μl;

Tekočina v slini se lahko uporablja tudi kot vir encima (slina se pred destilirano vodo predhodno razredči 100-krat), vendar se obseg norme zelo razlikuje.

6) Delovni reagent (substrat - 1,8 mmol / l v MES-pufru (pH 6,0 ± 0,1)).

Delovni reagent je primeren za uporabo, če njegova optična gostota ni večja od 0,6 enote optične gostote. pri valovni dolžini 405 nm in ni motnosti.

Pred analizo je treba reagente segrevati na temperaturo merjenja (37 ° C).

Vsebino epruvete premešamo in vklopimo štoparico. Izmerite optično gostoto vzorca proti destilirani vodi pri dolžini 405 nm v natanko 1 minuti. Meritev ponovite 3-krat v presledku 1 min. Izračunajte spremembo optične gostote na minuto in nato izračunajte povprečno meritev optične gostote na minuto (Dop / min).

Izračun aktivnosti faktorja a-amilaze, ki ga opravimo s formulo:

kjer je Dop / min povprečna sprememba optične gostote na minuto;

1,025 - skupna prostornina raztopine v kiveti;

1000 je pretvorbeni faktor ml v l;

12,9 - milimolarni absorpcijski koeficient 2-kloro-p-nitrofenola;

0,025 je volumen seruma v ml;

1,0 je dolžina optične poti.

Pri spreminjanju navedenih parametrov je treba faktor ponovno izračunati. Če aktivnost a-amilaze presega 1500 U / l (točka zunaj linearnosti umeritvene krivulje), je treba analizirani serum razredčiti 1: 1 s slano raztopino in meritev ponoviti, rezultat izračuna pa pomnožiti z 2.

Klinična in diagnostična vrednost: a-amilaza je endohidrolaza, v človeškem telesu pa več izoencimov: encim izločajo žleze slinavk (tip S), trebušna slinavka (P-tip); majhna encimska aktivnost najdemo v jetrih, skeletnih mišicah, solzilni tekočini, izločanju mlečnih žlez in različnih tumorjev.

Aktivnost a-amilaze v serumu se znatno poveča zaradi P-izoencima pri različnih boleznih trebušne slinavke (pankreatitis, absces, travma, rak).

Pri poškodbah žlez slinavk (rak žleze slinavke, endemični parotitis, makroamilazemija) se poveča tudi aktivnost a-amilaze v serumu, vendar na račun S-izoencima.

Obe a-amilazni izoencimi imata majhno molekulsko maso (45.000), zato se filtrirata v ledvicah in izločata z urinom. Povečanje aktivnosti amilaze v urinu (diastaza) pri akutnem pankreatitisu se pojavi 6 do 10 ur pozneje kot v krvnem serumu.

Na podlagi biohimist.ru

Načelo metode. Alfa-amilaza katalizira hidrolizo netopnega obarvanega škrobnega substrata in tvori modro vodotopno barvilo. Količina sproščenega barvila je sorazmerna z aktivnostjo encima.

Potek odločnosti. Za določitev aktivnosti alfa-amilaze v serumu ali urinu pripravimo vzporedne poskusne in kontrolne vzorce ter analiziramo v naslednjem zaporedju:

Vzorce zmešamo, pustimo stati 15 minut, centrifugiramo 5 minut pri 3000 vrt / min. Nato izmerimo optično gostoto poskusnega vzorca proti kontroli na FEC pri valovni dolžini 590 nm v kivetah s debelino plasti 5,0 mm.

Aktivnost encima najdemo na urniku umerjanja.

Klinična in diagnostična vrednost določanja aktivnosti alfa-amilaze v serumu in urinu: pri ljudeh se alfa-amilaza izloča iz trebušne slinavke in žlez slinavk, njena majhna aktivnost pa najdemo v tkivu jeter in skeletnih mišicah. Molekulska masa encima je relativno nizka (48.000), zato se filtrira v glomerulih ledvic in je vsebovana v urinu.

Pri zdravih ljudeh je serumska encimska aktivnost od 140 do 350 U / l, v urinu od 1000 do 2000 U / l. Aktivnost amilaze se poveča predvsem pri boleznih trebušne slinavke (pri akutnem pankreatitisu). Bolezni žlez slinavk in kroničnih ledvičnih bolezni vodijo do povečanja aktivnosti serumske alfa-amilaze.

Delo številka 5. Učinek adrenalina na glukozo v krvi.

Napredek pri delu. Pri zajcih, iz obrobne vene ušesa ali podgane iz kaudalne vene, se zbere 0,1 ml krvi in ​​glukoza v krvi se določi z metodo o-toluidina.

Potem se žival na svoji strani reže, drgne kožo z alkoholom in 0,1% raztopino adrenalina vzamemo subkutano s hitrostjo 0,1 ml na 1 kg teže in po 30 minutah ponovno merimo glukozo v krvi.

Številka dela 6. Učinek insulina na glukozo v krvi.

Napredek pri delu. Od drugega kunca iz obrobne vene ušesa ali podgane iz kaudalne vene vzemite 0,1 ml krvi in ​​določite vsebnost glukoze v krvi.

Pri živalih krzno narežite na stran, zdravite z alkoholom in injicirajte subkutano insulin v višini 1,5 mednarodnih enot na kg teže. Uro kasneje ponovno določite glukozo v krvi. Žival se subkutano uvaja s 5% raztopino glukoze, da se prepreči inzulinski šok: zajec 10 ml, podgana - 1 ml.

Rezultati tretjega in četrtega dela razpredelnice in sklepne ugotovitve.

Na podlagi materialov www.ronl.ru

α-amilaza (diastaza, 1,4-a-D-glukan hidrolaza, EC 3.2.1.1.) katalizira hidrolizo α-1,4-glukozidnih vezi škroba, glikogena in sorodnih polisaharidov v maltozo, dekstrine in druge polimere. Molekulska masa encima je okoli 48.000 D. Molekula vsebuje kalcijev atom, ki ne aktivira samo encima, temveč ga tudi ščiti pred delovanjem proteaz, aktivnost amilaze pa se povečuje z vplivom ionov klora. V krvi je predstavljen z dvema izoencema: pankreasnim - P-tipom in S-tipom, od katerih je vsak razdeljen na več frakcij. Izoencim tipa S je na splošno 45–70% (v povprečju 57%), ostalo je v P-tipu. Oba izoencima imata skoraj identične katalitske in imunološke lastnosti, rahlo se razlikujeta pri elektroforetski mobilnosti, vendar sta dobro ločena z gelsko filtracijo na DEAE - Sephadex. Obstaja tudi makroamilaza, ki se ne izloča preko ledvic, lahko pa jo najdemo v normalnem krvnem serumu (približno 1% zdravih ljudi) in patologiji (2,5%).

Visoka aktivnost amilaze je opažena v parotidni in trebušni slinavki. Vendar pa je njegova aktivnost, čeprav precej nižja, najdena v velikih in majhnih črevesih, skeletnih mišicah, jetrih, ledvicah, pljučih, jajčnih celicah, maščobnem tkivu. V krvi je encim povezan s plazemskimi beljakovinami in tvorjenimi elementi. Aktivnost encimov je enaka za moške in ženske in ni odvisna od narave zaužite hrane in časa.

Obstoječe metode za proučevanje aktivnosti a-amilaze v bioloških tekočinah so razdeljene v dve veliki skupini:

1. Saharifikacija (reduktometrija), ki temelji na študiji sladkorjev, ki nastanejo iz škroba, z zmanjševanjem učinka glukoze in maltoze.

2. Amiloklastika, ki temelji na določanju ostanka neobdelanega škroba: t

• glede na stopnjo intenzivnosti njene reakcije z jodom. Te metode so bolj občutljive in specifične, vendar je njihova natančnost v veliki meri odvisna od kakovosti škroba in optimizacije pogojev določanja.
• viskoznostne suspenzije škroba, nimajo visoke natančnosti in se sedaj ne uporabljajo.

3. Metode, ki uporabljajo kromogene substrate, temeljijo na uporabi kompleksov substratnih barvil, ki se pod delovanjem α-amilaze razgradijo in tvorijo vodotopno barvilo.

4. Metode, ki temeljijo na vezanih encimskih reakcijah: t

Škrob + H₂O Maltose + Maltotriose + dekstrin

Maltose + N₂O 2 glukozi

Glukoza + ATP Glukoza - 6 - F + ATP

Glukoza-6-F + NADF glukonat-6-F + NADFN

Aktivnost encima je določena s hitrostjo kopičenja NADPH.

Dve amiloklastični metodi sta bili odobreni kot enotni: Karavey (z odpornim škrobnim substratom) in Smith-Rohe.

α-amilaza katalizira hidrolizo netopnega obarvanega škrobnega substrata, da se tvori modro vodotopno barvilo. Količina sproščenega barvila je sorazmerna s katalitično aktivnostjo encima.